【作 者】：网站采编
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【摘 要】：文章目录 材料和方法 1．实验材料 2．实验方法 2.1 细胞培养: 2.2 慢病毒转染实验: 2.3 RNA提取: 2.4 Real-time PCR检测: 2.5 Western blotting检测: 2.6 MTT法检测细胞增殖: 2.7 Transwell迁移实验 2.8 统计

文章目录

材料和方法

1．实验材料

2．实验方法

    2.1 细胞培养:

    2.2 慢病毒转染实验:

    2.3 RNA提取:

    2.4 Real-time PCR检测:

    2.5 Western blotting检测:

    2.6 MTT法检测细胞增殖:

    2.7 Transwell迁移实验

    2.8 统计学分析:

结果

1.SK-GT-4细胞转染慢病毒LV-shNC和LV-sh S100A6后，S100A6的m RNA和蛋白表达情况

2．敲低S100A6对细胞增殖和迁移的影响

3.p-ERK和p-Akt对SK-GT-4-shS100A6细胞增殖和迁移的影响

4．抑制p-ERK和p-Akt对下游参与增殖、迁移相关蛋白表达的影响

讨论

文章摘要:目的探讨S100钙离子结合蛋白A6（S100A6）对食管腺癌SK-GT-4细胞增殖和迁移的影响。方法慢病毒转染,构建稳定细胞系sh NC和sh S100A6,Real-time PCR检测S100A6 m RNA表达情况;倒置显微镜和MTT检测细胞的增殖能力,Transwell检测细胞的迁移能力及U0126（MER1/2的抑制剂）、LY294002（PI3K抑制剂）对细胞增殖、迁移的影响; Western blotting检测细胞中S100A6、p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白的表达情况,检测U0126、LY294002对p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白表达的影响。结果构建了敲低S100A6的稳定细胞系,敲低S100A6促进了细胞的增殖和迁移,p-ERK、p-Akt水平升高,细胞周期抑制蛋白p21表达量下降、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）表达升高,间质细胞标志蛋白——波形蛋白（vimentin）、β-连环蛋白（β-catenin）表达升高; U0126处理sh S100A6细胞后,对细胞的增殖无影响,抑制细胞的迁移,p-ERK、β-catenin表达下降; LY294002处理sh S100A6细胞后,抑制细胞的增殖和迁移,p-Akt表达下降,p21表达量升高,cyclin D1表达量下降,β-catenin表达下降。结论低表达S100A6促进细胞的增殖和迁移,其可能机制是通过p-Akt调控细胞周期的进程促进细胞增殖,通过激活p-Akt/p-ERK调控β-catenin促进细胞的迁移。

文章关键词:

项目基金:文章来源：《新乡医学院学报》 网址: http://www.xxyxyxb.cn/qikandaodu/2021/1001/671.html